Diseño

Se realizó un estudio de tipo cuantitativo, analítico, experimental y prospectivo, el cual tuvo una duración de 3 meses. El período de estudio fue desde agosto hasta octubre del año 2023.

Ámbito

Se llevó a cabo en el Bioterio de la UAI, ubicado en calle Presidente Roca N° 1642, Rosario, Santa Fe, Argentina. Cabe destacar que esta es una universidad privada, laica, autónoma, plural y sin fines de lucro de Argentina. La cual integra la red de instituciones Vanguardia Educativa “VANEDUC”, entidades no confesionales dedicadas a la docencia e investigación educativa desde 1942.

Población

La población de estudio fue conformada por animales, se utilizó un total de 6 ratones C57BL/6J de 6 a 8 semanas de edad, presentes en el bioterio de la UAI.

Criterios de inclusión

• Ratones hembra adultas de la línea C57BL/6J de 6 a 8 semanas de edad.

Criterios de exclusión

• Ratones C57BL/6J no sanos o con compromiso aparente del bienestar.

Muestreo y tamaño muestral

El muestreo fue no probabilístico por conveniencia. La muestra quedó conformada por aquellos ratones que reunían los criterios de inclusión especificados para este estudio.

Procedimiento

Para el desarrollo de este trabajo se utilizaron ratones hembra adultas de las cepas C57BL/6J. Se mantuvieron bajo un ciclo de luz-oscuridad de 12 horas y se alimentaron con comida regular para ratones.

Los animales fueron separados al azar en dos grupos: sham y OUU. Los animales sham fueron sometidos a cirugías simuladas (sham: término universal, que proviene del inglés, que indica intervención simulada). El procedimiento quirúrgico de la OUU se realizó de acuerdo a Chevalier et al. [7]. Los ratones fueron anestesiados con una mezcla de ketamina, xilacina y solución fisiológica (100 mg/3 mg/kg peso corporal), a través de una inyección intraperitoneal. Una vez constatado que los animales estaban profundamente anestesiados (testeo de reflejo podal), se dio comienzo al procedimiento quirúrgico. Los mismos fueron afeitados en el lado izquierdo del abdomen, y se realizó una primera incisión vertical a través de la piel con un bisturí y una segunda incisión a través del peritoneo para exponer el riñón. Quince mm por debajo de la pelvis renal, el uréter izquierdo fue doblemente ligado con seda quirúrgica y luego se cortó entre ambas ligaduras. Posteriormente, el riñón ligado se recolocó suavemente en su posición anatómica correcta y se esterilizó toda la zona. Se mantuvo especial cuidado en la pérdida de fluido corporal, aportando solución fisiológica de ser necesario mediante cateterización de la vena femoral o mediante lavados intraperitoneales. Finalmente, las incisiones se suturaron y los ratones fueron enjaulados individualmente hasta el fin de los estudios. En este modelo de obstrucción, bajo una dieta normal, el flujo sanguíneo renal y la tasa de filtración glomerular se reducen significativamente dentro de las 24 h y, la inflamación intersticial, la dilatación tubular, la atrofia y la fibrosis son evidentes después de 7 días. El riñón obstruido alcanza su máxima disfunción alrededor de los 15 días después del procedimiento, periodo en el cual los animales no manifiestan signos de sufrimiento evidente alguno (presumiblemente debido a fenómenos compensatorios por parte del riñón sano). Luego de transcurridas 2 semanas desde las cirugías, los ratones fueron anestesiados nuevamente con ketamina/xilacina (100 mg/3 mg/kg peso corporal) y se les indujo la muerte por extracción total de sangre mediante punción cardiaca, con la cual se obtuvo suero por decantación seguida de centrifugación a 3500 rpm durante 10 min. Luego de la exanguinación, se recogió el riñón izquierdo (obstruido) y derecho (control) de cada animal y se procesó de acuerdo a cada determinación experimental a realizar.

Caracterización del daño: se midieron parámetros bioquímicos de la función renal y se realizaron análisis histológicos. La función renal animal se determinó analizando los valores de urea en suero utilizando kits comerciales (Wiener lab), y respetando las instrucciones del fabricante. Los análisis histológicos, se realizaron en secciones de tejido renal embebidos en parafina. Para evaluar la severidad de la injuria tubular, y de la fibrosis tubulointersticial, se realizaron tinciones de cortes de tejido renal con hematoxilina-eosina (H-E) y con Picrosirius Red, respectivamente.

Definiciones

Ratón C57BL/6J: cepa de ratón de laboratorio genéticamente modificada respecto de un animal salvaje muy utilizada como modelo de enfermedades humanas.

Variables

• Valores de urea en plasma: variable cuantitativa continua.

Operacionalización: mg/dL.

• Daño en secciones de tejido renal embebido en parafina: variable cualitativa nominal dicotómica. Operacionalización: Si-No.

• Cambios morfológicos macroscópicos después de la intervención: variable cualitativa nominal dicotómica.

Operacionalización: Si- No

Análisis estadísticos

En cada caso se aplicaron los estudios estadísticos adecuados. Cada grupo de animales contó con un n igual o mayor a 3. Los resultados se expresaron como valor de la media ± SE. Dado que solamente se realizó la comparación de los valores de urea en suero, la significancia de las diferencias halladas se puso a prueba mediante un t test de datos no apareados seguido de la corrección de Welch.

Consideraciones éticas

Todas las pruebas planteadas están aprobadas por el comité institucional para el cuidado de animales de laboratorio (CICUAL).